1 范围
本标准规定了出口食品中黄曲霉毒素残留量的高效液相色谱法和荧光光度测定方法。
本标准中高效液相色谱法适用于玉米、茶叶、花生果、花生米和苦杏仁中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定；荧光光度法适用于玉米、花生果花生米和苦杏仁中黄曲霉毒素总量的测定。
2 规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
第一法高效液相色谱法
3 测定方法
3.1 方法提要
试样中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2用三氯声烷提取，提取液经弗罗里硅土柱净化浓缩，定容[或用甲醇水(7+3)提取提取液经过滤、稀释后，用免疫亲和柱净化，以甲醇洗脱]。最后用柱后衍生液相色谱荧光检测器法测定，外标去定量。
3.2 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水。
3.2.1 三氯甲烷。
3.2.2 苯：高效液相色谱纯。
3.2.3 乙腈：高效液相色谱纯。
3.2.4 甲醇：高效液相色谱纯。
3.2.5 丙酮。
3.2.6 无水硫酸钠：600℃灼烧4h，贮于干燥器中备用。
3.2.7 硅藻土：Celit 545
3.2.8 弗罗里硅土：60~100目，600℃灼烧4h，贮于干燥器中备用，使用前130℃活化4h。
3.2.9 过溴化溴化吡啶(pyridinium bromide perbromide)
3.2.10 氯化钠。
3.2.11 甲醇。
3.2.12 甲醇水(7+3，体积比)：量取700mL甲醇(3.2.11)与300mL水混合。
3.2.13 乙腈水溶液(1+1，体积比)：量取100mL乙腈(3.2.4)与100mL水混合。
3.2.14 苯-乙腈溶液(98+2，体积比)：量取980mL苯(3.2.2)与20mL乙腈(3.2.3)混合
3.2.15 三氯甲烷-甲醇溶液(9十1，体积比)：量取900mL三氛甲烷(3.2.1)与100mL甲醇(3.2.11)混合。
3.2.16 丙酮水溶液(99+1，体积比)：量取990mL丙酮(3.2.7)与10mL水混合。
3.2.17 柱后衍生液(0.05mg/mL过溴化溴化吡啶水溶液)：称取0.05g过溴化溴化吡啶，溶解于1000mL水中，以0.45μm的滤膜过滤。
3.2.18 次氯酸钠溶液(有效氯含量为5%)：用于浸泡器皿，去除黄曲霉毒素污染。
3.2.19 黄曲霉毒素B1(CAS 编号1162-65-8)、B2(CAS 编号7220-81-7)、G1(CAS 编号1165-39-5)、G2(CAS 编号7241-98-7)标准物质：纯度大于等于99%。
3.2.20 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准储备溶液：准确称取适量黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准物质(3.2.19)，用苯-乙腈溶液(3.2.14)配成0.1mg/mL的标准储备液。该溶液于4℃避光保存。
3.2.21 1μg/mL的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准中间溶液：分别吸取1mL标准储备溶液(3.2.20)移至100mL容量瓶中，用乙腈(3.2.3)定容至刻度。该溶液在4℃避光保存。
3.2.22 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准工作溶液：根据需要适当移取黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准中间溶液，用甲醇稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液现用现配。
3.3 仪器和设备
3.3.1 高效液相色谱仪配有荧光检测器和柱后衍生装置。
3.3.2 高速均质器。
3.3.3 玻璃纤维滤纸。
3.3.4 玻璃注射器：10mL、20mL。
3.3.5 空气压力泵。
3.3.6 旋涡振荡器。
3.3.7 平板摇床。
3.3.8 真空泵。
3.3.9 旋转蒸发器。
3.3.10 心形瓶。
3.3.11 柱后衍生泵。
3.3.12 光化学衍生装置。
3.3.13 电化学衍生装置
3.3.14 0.45μm滤膜。
3.3.15 氮气
3.3.16 黄曲霉毒素免疫亲和柱：含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的抗体。
3.3.17 弗罗里硅土净化柱：玻璃柱，30cm×20cm(内径)，用三氯甲烷湿法依次装人1g无水硫酸钠，0.7g弗罗里硅土(3.2.10)，5g无水硫酸钠。
3.4 测定步骤
3.4.1 提取净化(可根据实验条件选用以下任何一种方法)
3.4.1.1 免疫亲和层析净化
称取试样25g(精确到0.01g)于250mL具塞锥形瓶中，加人5g氯化钠及125mL甲醇-水(3.2.12)，以均质器高速搅拌提取2min。过滤，移取15.0mL滤液至250mL具塞锥形瓶中，并加人30.0mL水稀释混匀，以玻璃纤维滤纸过滤几次，直至滤液澄清，随即进行免疫亲和柱净化操作。将免疫亲和柱连接于20mL玻璃针筒下，准确移取15.0mL(相当于1g试样)上述澄清滤液，注入玻璃针筒中，将空气压力泵与针筒连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速全部过免疫亲和柱，再使2mL~3mL空气通过柱体。以2×10mL水淋洗柱子，弃去全部流出液，再使2mL~3mL空气通过柱体准确加人1.0mL甲醇(3.2.4)进行洗脱，洗脱流速为1mL/min~2mL/min。收集全部洗脱液于玻璃试管中，供液相色谱测定。
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