NY/T 1970-2010 饲料中伏马毒素的测定 检测标准

1 范围

本标准规定了饲料中伏马毒素B1和伏马毒素B2含量的液相色谱申联质谱测定方法和液相色谱测定方法。

本标准适用于植物源性饲料原料、精料补充料、配合饲料和浓缩饲料中伏马毒素B1和伏马毒素B含量的测定。

本标准的方法检出限和定量限：液相色谱串联质谱法的检出限为0.01mg/kg，定量限为0.05mg/ kg；液相色谱法的检出限为0.01mg/kg，定量限为0.05mg/kg。

2 规范性引用文件

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GB/T 682 分析实验室用水规格和试验方法

GB/T 14699.1 饲料 采样

GB/T 20195 动物饲料 试样的制备

3 试样制备

按GB/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，按GB/T 20195 用四分法缩减至500g，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀后装入密闭容器。

4 液相色谱串联质谱法(仲裁法)

4.1 原理

试样中伏马毒素B1和伏马毒素B2用甲醇溶液提取，提取液经强阴离子固相萃取小柱净化后，用液相色谱一串联质谱仪测定，采用色谱保留时间和质谱碎片离子丰度比定性，基质校准外标法定量。

4.2 试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682 规定的一级水。

4.2.1 甲醇：色谱纯。

4.2.2 甲酸：色谱纯。

4.2.3 乙酸：优级纯

4.2.4 氢氧化钠溶液(0.2mol/L)：准确称取4g氢氧化钠于烧杯中，加适量水溶解后，移人0.5L容量瓶中，加水定容至刻度。

4.2.5 盐酸溶液(0.2mol/L)：准确移取18mL盐酸于1L容量瓶中，加水定容至刻度，混匀后备用。

4.2.6 乙酸甲醇(1%)：准确移取10mL乙酸于1L容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀后备用。

4.2.7 甲酸甲醇溶液(0.1%)：准确移取1mL甲酸于1L容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀后备用。

4.2.8 甲酸溶液(0.1%)：准确移取1mL甲酸于1L容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后备用。

4.2.9 甲醇溶液(75%)：取甲醇750mL加水250mL，混匀后备用。

4.2.10 伏马毒素B1，纯度≥95.0%。

4.2.11 伏马毒素B2，纯度≥97.0%。

4.2.12 伏马毒素标准储备液：分别准确称取适量伏马毒素B1和伏马毒素B标准品，用甲醇溶液(4.2.9)溶解并定容至10m，配制成200mg/L的标准储备液，-18℃冰箱中保存，有效期6个月。

4.2.13 混合标准储备液：取伏马毒素B和伏马毒素B2标准储备液(4.2.12)以1：1比例混合，得混合标准储备液，浓度为100mg/L，-18℃冰箱中保存，有效期6个月。

4.2.14 混合标准中间液：准确移取10mL.混合标准储备液(4.2.13)于100m·容量瓶中，用甲醇溶液(4.2.9)定容至刻度，浓度为10mg/L，-18℃冰箱中保存，有效期3个月。

4.2.15 强阴离子交换固相萃取柱：500mg，3mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL甲醇溶液(4.2.9)活化。

4.2.16 空白试料：含伏马毒素B1和伏马毒素B2均小于0.05mg/kg的植物源性饲料原料；含伏马毒素B1和伏马毒素B2均小于0.25mg/kg的精料补充料、配合饲料和浓缩饲料。

4.3 仪器和设备

4.3.1 液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源。

4.3.2 离心机：最大转速5000r/min或以上。

4.3.3 分析天平：感量0.01mg。

4.3.4 天平：感量0.01g。

4.3.5 超声波清洗器。

4.3.6 氮吹仪。

4.3.7 固相萃取装置。

4.3.8 涡旋混合器。

4.3.9 pH计。

4.3.10 匀质器。

4.4 分析步骤

4.4.1 提取

称取2g试样(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入10mL甲醇溶液(4.2.9)，涡旋1min，然后超声提取5min，以5000r/min的速度离心2min，移取上清液后同样步骤提取一次，合并上清液。用氢氧化钠溶液(4.2.4)或盐酸溶液(4，2.5)调节pH至5.8~6.5，待净化。

4.4.2 净化

准确移取提取液(4.4.1)2mL至固相萃取小柱(4.2.15)中。依次用3mL甲醇溶液(4.2.9)、3mL甲醇淋洗小柱，抽至近干后用10mL乙酸甲醇(4.2.6)洗脱。整个固相萃取过程流速控制在lmL/min~2mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL甲醇溶液(4.2.9)溶解，过0.22μm滤膜后进行液相色谱串联质谱分析。

4.4.3 基质校准标准样品的制备

有空白试料时，分别准确移取伏马毒素混合标准中间液(4.2.14)适量，植物源性饲料原料测定时配制浓度为0.015mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L和2.0mg/L，其他饲料测定时配制浓度为0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L和10.0mg/L的系列标准溶液；取空白试料，按4.4.1~4.4.2步骤处理，在洗脱液中分别加入各浓度标准溶液1.0mL，氮气吹干后用甲醇溶液(4.2.9)溶解上机测定，以定量离子对峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制基质校准标准曲线。无法获得空白试料时，直接用测定样品经4.4.1~4.4.2步骤处理后洗脱液中加入1.0mL~5.0mg/L的标准溶液作为基质校准标准样品，吹干后用甲醇溶液(4.2.9)溶解上机测定。

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